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ATP+IMS实现大肠埃希菌 O157:H7快速检测 |
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来源:《食品安全导刊》
作者:彭志刚 朱珍 殷昊 发布时间:2008-05-19
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大肠埃希菌O157:H7属于大肠杆菌中的埃希菌属(Escherichia),是一种致病菌。自1982年,美国发生首次由大肠埃希菌O157:H7引起的出血性肠炎以来,该菌在世界范围内曾多次暴发食源性疾病。目前,大肠埃希菌O157:H7已被认定为20世纪七十年代以来新发现的8种传染病病原体之一。近年来,其感染呈全球流行趋势,并已经成为人类健康的重要微生物威胁。 快检成为大肠埃希菌检测的趋势 大肠菌群为需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌,是食品微生物检测必检项目之一。目前,国内采用的检测方法主要有国家标准《菌落总数测定》(GB/T 4789.3-2003)和行业标准《进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数》(SN/T 1059.2-2002)。此外,还有《大肠菌群的快速检测》(GB/T 4789.32-2002)、《动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法》(NY/T 555-2002)等。其中,国家标准采用乳糖发酵试验、分离培养和证实试验三步培养法,成本低,被广泛接受。但是存在耗时长等缺点,一般需要2-3天。而目前,随着各种技术的发展,免疫磁珠(IMS)法、PCR检测法、免疫磁珠法和PCR相结合法、ATP生物发光磁酶免疫技术(ATP+IMS)等,因检测速度快而逐渐成为大肠埃希菌O157:H7检测的主要发展方向。 ATP生物发光磁酶免疫技术 免疫磁珠法实现细胞分离 免疫磁珠法是一种用于细菌提取分离的实验方法。由于免疫磁珠能特异性的与靶物质结合并使之具有磁响应性,因此在实验时,可将待测的特定微生物单克隆或多克隆抗体包被在磁珠上构成免疫磁珠。然后将免疫磁珠与含有靶物质的混合物共同培养,免疫磁珠通过抗原抗体反应,可选择性的与靶物质结合。结合后的化合物在通过一个磁场装置后,与免疫磁珠结合的靶物质就会被磁场所吸引,从而与其他物质分离开来。 免疫磁珠法具有操作简单、分离速度快、效率高、可重复性好的特点,并且不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能。 ATP生物发光技术实现快速检测 三磷酸腺苷(ATP)生物发光技术是一种快速检测方法,其反应原理与萤火虫体发光相同,即在荧光素-荧光素酶的存在下,ATP将化学能转化为光能产生荧光,并且在一定的ATP浓度范围内,ATP浓度与发光强度呈线性关系。因此,通过测定发光强度即可获得发光体的含量。由于各生长期的细菌均有较恒定的ATP含量,因此,ATP生物发光技术可用于细菌的检测。 ATP生物发光技术由于没有微生物培养过程,因此,短时间内(十几分钟)即可得到检测结果。此外,ATP生物发光法对于能量物质的测定具有非常高的灵敏性,可检测10-15mol的ATP(相当于...................【要阅读全文点击订阅杂志】 (责任编辑:wangcongmin)
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