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实时RT-PCR技术实现H5N1禽流感病毒的快速检测
来源:莱茵技术监护(深圳)有限公司食品部 作者:刘暖婷 发布时间:2008-07-01 阅读次数:  

高度致病的H5N1禽流感病毒于2008又再次袭击了中国和东亚其他地方。禽流感病毒(AIV)直径约100纳米,由8个长度介于9002400个核糖核苷酸的单负链核糖核酸(RNA)组成。各种禽流感病毒以鸟类为传播载体。其中, 2-5%的野生鸟类携带禽流感病毒,禽流感病毒大部分对鸟类不致命,并且大部分也不会传染给人类。但是,在中国,泰国和越南,H5N1禽流感病毒被证明会对人类造成致命的伤害。亚洲及土耳其,该病毒已经造成数人死亡,但似乎并未发现人传人的案例。

H5N1禽流感病毒是根据集中在病毒膜上的禽流感病毒关键表面蛋白的亚型血凝素” (HA or H)神经氨酸苷酶” (N)英文名称第一个字母命名的。

循环爆发的H5N1型禽流感病毒足够说明了发展一个高度灵敏,准确,快速的诊断测试的必要性。其重要性不仅体现在控制感染和早期抗病毒治疗方面,而且体现在对食品供应链上快速有效的产品控制方面。然而,细胞培养和随后的血凝素(HA or H)和神经氨酸苷酶(N)亚型血清测试需要1-2周的才能得到测试结果。因此,他们对货架寿命较短的食品在产品卫生状况方面的评估作用不大;而商业上通用的禽流感病毒抗原快速测试虽然既快速又简便,但亚型( H1H5型)病毒存在交叉反应,难以做到亚型确诊。针对H5N1型禽流感病毒的检测现状德国莱茵TÜV中国集团深圳食品实验室直接成功开发了快速的,高灵敏度与特异性的,以荧光亮度检测为基础的,定量的RT-PCR检测方法。

与其他检测方法相比,实时RT-PCR技术的优势主要表现在检测速度快,能进行病毒载量的分析,具有更高的灵敏度和特异性。因此,应用实时RT-PCR技术的分子生物学检测方法成为目前最有效及最快速的禽流感病毒检测方案。

由于RNA病毒经常发生快速变异,这使得对其检测必须集中于基因序列固定不变的区域。对广泛的禽流感病毒检测来说,首选的基因序列是基质蛋白(M)基因。但是针对H5N1型禽流感病毒,还应该测定HN这两个特定的基因。因此,我们采取了以下的检测方案:首先是对样品进行基质蛋白的初步扫描测试,以确定是否存在禽流感病毒。若结果为阳性,则需要对血凝素5 H5型)和神经氨酸苷酶1N1型)进行特异确认检测(欲了解更多H5N1禽流感测试,可以直接联系莱茵技术监护(深圳)有限公司食品部)。


(责任编辑:caicang)
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